用primer 5.0 设计引物的时候,哪个才是真正的PCR产物退火温度

用primer 5.0 设计引物的时候,哪个才是真正的PCR产物退火温度
Tm,看哪个?
尘埃没落定 1年前 已收到3个回答 举报

xianggang2018 种子

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第四项,Tm【℃】,三行分别是正义引物,反义引物和PCR产物的退火温度.

1年前 追问

2

尘埃没落定 举报

这我知道,在PCR的时候退火温度应该选哪个?

举报 xianggang2018

当然是看引物的了。设的时候应该让两条引物Tm值尽量接近,要是没办法选择,PCR的时候就选低一点的好了。反正我现在一般都先用54度先扩一遍,这个温度是很温和的,一般都能扩增出来。要是特异性不好,有杂带,再升高温度,要是扩不出来,再降低温度。经常软件给出来的温度实际做的时候会有出入的。

jjhjci 幼苗

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345345345345345

1年前

2

老虎仔 幼苗

共回答了6个问题 举报

引物太短了 手动加上几个bp
退火温度低了
当然是看TM【℃】了

1年前

2
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