我在设计引物的时候出现了疑问新手菜鸟求助,师姐曾留下一个设计好的质粒,酶切位点少.然后我打算将她的目的基因换成我自己的.

我在设计引物的时候出现了疑问
新手菜鸟求助,师姐曾留下一个设计好的质粒,酶切位点少.然后我打算将她的目的基因换成我自己的.但我的目的基因上酶切位点很多,启动子和终止子之间仅有的两个酶切位点目的基因上均有.我想可不可以将启动子抠下来,末端引物设计再多加一个酶切位点,即末端引物共两个酶切位点,然后再按上.不知各位高人是否其他的高见?一段设计两个酶切位点可行度是否较低?
moyiwu 1年前 已收到1个回答 举报
赞

二十八号的冬雨 幼苗

共回答了24个问题采纳率：87.5% 举报

　　具体有些什么酶切位点,能说来听听嘛?空对空很难讨论出什么结果.

1年前 追问

1

moyiwu 举报

您说启动子和终止子之间的酶切位点吗？HindIII-启动子-BamHI-师姐的目的基因-SacI-终止子 ，我的目的基因上有BamHI 。所以我想将启动子下游加上一个酶切位点，这样下游就有两个酶切位点:HindIII-启动子-SacI-多插入的酶切位点-终止子，然后用SacI和插入的酶双酶切加入我的基因就行了。您看这样可行性大吗？

举报 二十八号的冬雨

　　你的意思是用启动子为模板做PCR，利用PCR把一个酶切位点引入启动子下游，对吧？这么做当然可以，不过完成后你可能要对启动子测序，因为PCR可能会造成启动子有突变。所以这不是最好的策略。 　　你的目的基因也要经过PCR，然后再连接到这个载体中吗？还是直接从其它载体切下来接进去？你的目的基因上有BglII吗？

moyiwu 举报

我本想将启动子弄到一个质粒上，再切下来 但是序列总是不如意 所以我想只有这种方法了 但是一段引物加两个位点总觉得不太可行 作为一个新手菜鸟来说。目的基因也要经过PCR的 Bgl II酶切位点 目的基因上是有的。。。。

举报 二十八号的冬雨

目的基因上游有什么能用的酶切位点？你做过平端连接吗？
可能相似的问题

你能帮帮他们吗

精彩回答

Copyright © 2024 YULUCN.COM - 雨露学习互助 - 17 q. 0.042 s. - webmaster@yulucn.com