设计引物目的基因前延后延我设计引物,后期做表达.想要把目的基因前加500bp及后加500bp现在的问题是,我在查结核杆菌

设计引物目的基因前延后延
我设计引物,后期做表达.
想要把目的基因前加500bp及后加500bp
现在的问题是,我在查结核杆菌全长时发现两个连续的基因之间有一些bp的间隔


现在的问题是,我是按基因前延后延还是按

前面减500,后面减500啊?
_老杜的左手 1年前 已收到1个回答 举报
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抽风的夜晚 春芽

共回答了21个问题采纳率：76.2% 举报

　　那个数字就是你所要基因的起始和终止位点,你如果想在前后各加500bp,应该讲起始位点减500,终止位点加500.

1年前 追问

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_老杜的左手 举报

可是连续的两个基因中间存在的那些bp是什么啊？ 引物根据这些bp的设计合理吗？

举报 抽风的夜晚

　　非编码区啊。基因组中的非编码区很多的。根据这些非编码区设计引物是否合理取决于你引物的用途，为什么你要前后各延伸500bp？

_老杜的左手 举报

就是后期要做蛋白表达，不加长的话P不出目的基因全长吧。。。 只是想找个合适的引物， 看网上说还要防止移位，是不是意思是酶切位点到ATG必须是3的倍数 啊？

举报 抽风的夜晚

　　如果你只是做蛋白表达的话，只要扩增产物包含完整的基因就可以，实在没必要向两端各延伸500bp。 　　移位通常是在做融合蛋白的时候要考虑的问题，如果你不在编码序列内做操作的话，不需要考虑移位问题。

_老杜的左手 举报

我的目的基因是744bp，也就是说，PCR产物必须大于744就行了吧？ 我设计的上游引物在目的基因前60bp左右，下游引物在目的基因后300bp左右 非常感谢您的耐心解答

举报 抽风的夜晚

下游引物为什么那么靠后？

_老杜的左手 举报

分数比较高，

有个后25bp左右的，但是有Dimer

最好尽量靠近目的片段吗？

（目的基因是501-1245）

举报 抽风的夜晚

　　PCR片段短一些容易扩增。 　　这个位于1269的下游引物挺好的，Tm值和GC含量和上游引物都般配，分数也不低，85分，那点DIMER不算什么。你的引物还没加酶切位点？
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你能帮帮他们吗

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