菜鸟提问：PCR法检测某个已知基因,设计引物时,不P整个基因,只P一部分,要怎么选择这部分呢?

菜鸟提问：PCR法检测某个已知基因,设计引物时,不P整个基因,只P一部分,要怎么选择这部分呢?
用Taq酶PCR后,测序比对,同源性96.55%,P出的片段多了三个碱基GGG,这样算是PCR产物阳性吗?

日先人 1年前已收到1个回答举报

媛洛幼苗

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可能为突变或者非特异性扩增.首先排除测序问题.测序没有问题.重新扩增进行测序看是否为非特异性扩增.不是的话可能存在突变.你也可以咨询测序公司.至于设计引物直接选择在测序结果的文本中挑选出来即可.使用文本格式.

1年前追问

日先人举报

谢谢您的帮助那是PCR产物比对100%才能算是阳性吗？关于引物，我是想问只是P了基因的一部分，能肯定是P出了目的基因吗？若能，那P的这部分要根据什么原则选呢？不能随便从整个基因中挑一小段吧

举报媛洛

那要看你要求的是否为百分之百.是否为目的基因的根据您的比对来进行确认是否准确.确认是自己试验问题还是测序问题进行验证既可以.挑选引物原则是百分之百确认准确的前提下.假如不准确得重新试验.

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