求做western blot时提取贴壁细胞总蛋白详细的protocol

求做western blot时提取贴壁细胞总蛋白详细的protocol
另外,怎么看到有些protocol上没有煮蛋白这一步呢?是放在微波炉里加热就可以么?新手提的问题有些二~
yongan2004 1年前 已收到4个回答 举报
赞

yy浪子华 幼苗

共回答了12个问题采纳率：100% 举报

以6孔板的一个孔为例,先把培养液吸出,加入200ul的细胞裂解液,摇床摇15分钟,加loading buffer冰上放置5分钟,用细胞刮把皿底刮几次,然后全部吸出放到离心管里,95°水浴或者金属浴煮10分钟.
每个人的方法都不太一样吧,有的会在收样之后离心去沉淀,有的会再超声几分钟,有的直接拿loading buffer当裂解液用,个人觉得这些差别都不会影响你实验结果.
不过煮肯定是必须的,不然没法保存

1年前

1

beau25121 幼苗

共回答了29个问题 举报

用BCA蛋白检测试剂盒测定蛋白浓度后，－80℃冰箱保存待用。参考资料：丁香园 你说的是蛋白的提取与制备吧？组织的化就匀浆，细胞的话就裂解细胞然后用

1年前

2

x8023s 幼苗

共回答了5个问题 举报

我个人经验，也以六孔板为例：
1、移除旧培养液
2、每孔加PBS1ml，漂洗1到2次
3、每孔加蛋白裂解液100ul（蛋白裂解液不易加多，多了会稀释蛋白浓度）
4、然后用细胞刮棒来回刮除细胞，用枪头吸出液体至干净的EP管（操作最好在冰上，尽量吸干净）
5、短暂振荡一下，置冰静置15到30分钟
6、离心：12000转，20min。离心结束后你会看到管底...

1年前

2

宽带kk 幼苗

共回答了17个问题采纳率：94.1% 举报

一步法动物细胞活性蛋白提取试剂盒
产品编号：BSP022
产品简介：
动物细胞活性蛋白提取试剂盒可以高效，快速地从培养的悬浮或贴壁的动物细胞中提取有活性的细胞质和核蛋白质，该试剂采用一种温和的可以通过透析去除的非离子型去污试剂，该提取方法高于传统的反复冻溶法和超声法，已经在培养的COS-7, NIH3T3, H...

1年前

2
可能相似的问题

你能帮帮他们吗

精彩回答

Copyright © 2024 YULUCN.COM - 雨露学习互助 - 19 q. 0.018 s. - webmaster@yulucn.com