蛋白质的分子量在120KD,做western blot 跑胶时,用多大浓度的胶,蛋白每孔上样量是多少?

蛋白质的分子量在120KD,做western blot 跑胶时,用多大浓度的胶,蛋白每孔上样量是多少?
我做的蛋白分子量在120KD,砸出来的结果是很细很浅的,
xiaozei3 1年前 已收到6个回答 举报
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hustyzh 幼苗

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10%的分离胶,20ul上样量

1年前 追问

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xiaozei3 举报

我做的那个蛋白浓度只有300ng/μl，我现在上的是每孔30μl，但是蛋白条带还是很浅很细。

三棵冷髟 幼苗

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就用8%的，多点上样量

1年前

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善良背后的软弱 幼苗

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我用7％胶。分辨率还可以。
加多少样品要看抗体了。不过，一般WB能测到0.3ng的水平。不放心就用3ng （该蛋白）。

1年前

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liaoxiang68 幼苗

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可能你的蛋白含量很低。最好配的浓度再高点。你用的βactin条带清晰吗？目的蛋白在细胞内可能本来就表达的很少吧也许

1年前

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lgs1040 幼苗

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15% 15~45kDA
7.5% 30~120kDA
胶浓度越大，跑的蛋白分子量越小，你可以选择6%的，不过那样的话你就要跑就点，一般恒压140V跑。而且你的蛋白很浅应该不一定是跟胶有关，很多因素啊。也许你的抗体不是很好用（很细我不知道你什么意思，一般都是呈带状），或者你上的蛋白太少了，一般我都是30~50ug，就差不多了。
我看过了 你的蛋白才6ug，太少了 至...

1年前

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boling3694 幼苗

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采用10%的分离胶效果较好。你的带细而浅，可能存在以下原因：1.样品浓度较低。可先对样品浓缩后，再上样。2.转膜时间。分子量越大，时间越长。时间短，则转膜不彻底，时间太长，容易穿透，建议采用4℃过夜。3.抗体浓度太低或效果不好。1：500-1：5000适当调整。...

1年前

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