涛生烟灭
花朵
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连不上的因素比较多,首先你要先确保载体和基因片段已经用相同的内切酶处理好,然后再看连接体系中你所加的载体的量和基因片段的量是否合理,一般这两者的比例为1:5-1:10之间比较好,还有就是你的连接体系各种成分是否还有较,连接条件和连接时间是否充分,如果这些都没有问题,那可能就是酶的问题,建议使用TAKARA的连接酶,品质好,连接稳定.
1年前
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涛生烟灭
那我觉得还是载体与基因片段的问题，你酶切好后纯化回收酶切产物，将目的基因和载体分别电泳看看，然后根据条带的亮度，大概下相同的体积两者的分子个数的比，然后定好载体与基因片段的比例，如前面所说的，两者的分子摩尔比最好在1:5-1:10之间
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