已知蛋白质N端序列,要想扩增其全基因,怎样设计引物?从5'端or3‘端

已知蛋白质N端序列,要想扩增其全基因,怎样设计引物?从5'端or3‘端
如果N端序列为TNTPE请问下上游引物应为ACN AAY ACN CCN GAR 还是TGNTTRTGNGGNCTY?
涩蚂蚁 1年前 已收到2个回答 举报

魔羯女巫 幼苗

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首先请上NCBI BLAST搜索之(blastp).或许可以直接查到你研究物种的基因序列.即使没有,有近缘物种的基因序列也是个好的参考,通过比对,选择序列保守区设计引物.
若搜索不到任何信息,就需要通过设计兼并引物.比如你的蛋白质N端序列为
MTAGSR...
上游引物即为5'-ATG NNN NNN ...-3'(参考那个密码子表,和兼并碱基的标法,吾手头没有,记不住额)
下游引物就得反过来,假设蛋白序列为 N-XX-C 其编码DNA为 5'-GAN GAN-3'
则下引物为 5'-NTC NTC-3'

1年前

9

阿力力力 幼苗

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单链DNA在互补寡聚核苷酸片段的引导下,可以利用DNA聚合酶按5’→3’方向复制出互补DNA。这时单链DNA称为模板DNA,寡聚核苷酸片段称为引物(Primer),合成的互补DNA称为产物DNA。双链DNA分子经高温变性后成为两条单链DNA,它们都可作为单链模板DNA,在相应的引物引导下,用DNA聚合酶复制出产物DNA。PCR反应应用以上的基本过程,分别在待复制的已知序列DNA分子两端各设计一条引...

1年前

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