用EcorI和SalI酶切目的基因和载体后酶连,然后转化DH5a,涂板后却不长菌,是为什么呢?

千千雨语 1年前 已收到1个回答 举报

刘项从来不读书1 春芽

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用这两个酶没问题,你要确定几件事:
1 目的基因和载体都切开了吗?特别是目的基因如果是PCR后直接酶切效率会较低;载体上两个酶切位点连在一起吗?
2 感受态的效率问题
3 转化过程对不对,如抗生素加的对不对

1年前 追问

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千千雨语 举报

我的目的基因是转化后,摇菌提质粒后酶切。酶切后有有两条带,回收下面的一条。但是上面一条老感觉像两条离得很近的带,不知道为什么。 这两个酶在载体上中间隔了一个酶呢。 感受态、转化都没有问题。

举报 刘项从来不读书1

一个斑都不长?载体很大,还是你的目的带很长?用摩尔比载体:片段=1:10试试吧
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