若DNA需要使用两种酶进行酶切,应如何进行?

康熙出游 1年前 已收到3个回答 举报

amlh009 幼苗

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如果能够找到让两种酶同时作用的最佳缓冲液NEBuffer,那就可以同时双酶切.如果找不到就只能采用分步酶切.分步酶切应从反应要求盐浓度低的酶开始,酶切完毕后再调整盐浓度直至满足第二种酶的要求,然后加入第二种酶完成双酶切反应.NEBuffer的组成及内切酶在不同缓冲液中的活性见《内切酶在不同缓冲液里的活性表》及每支酶的说明书.

1年前

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cabdy 幼苗

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建议你参考Takle参考书,每个生物实验室都必备的,是否能够同步酶切,同步酶切的最佳缓冲液是什么,所需酶切温度和时间等,都要查找清楚

1年前

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奇异wan 幼苗

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可以在同一个反应体系中进行双酶切或者先一个酶切后纯化再使用另外一个酶酶切。

1年前

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