双酶切的20μL反应体系和反应时间如何确定?最好是说明原理.所用的酶都是Takara公司的

HLLOVESHAN 1年前 已收到1个回答 举报
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爱在遥远的附近 花朵

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模板DNA 几百ng-几ug,区别不大
酶1 0.5ul
酶2 0.5ul
buffer 去Takara产品目录查双酶切buffer表,按照那个倍数加,有时候需要BSA
水补足 20ul
30或37度,1-5小时都可以.有个别酶需要55度.
注意,酶别加多了,甘油浓度过高影响酶的活性.反应体系中甘油浓度要小于1%,而酶是储存在50%甘油中.

1年前

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