自己设计了一对引物克隆一段基因,PCR出不来结果可能是什么问题?

RACHELHU619 1年前 已收到5个回答 举报

天崖剑客 春芽

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可能是模板结构问题,多试几种PCR试剂,个人觉得Takara的LA扩增能力比较强

1年前

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dangn98 幼苗

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同学,这个问题我不知回答过多少次了,每次都是跟没回答一样,同学,P不出来很正常,有无数无数的原因都会导致P不出来,小到基因相互作用,大到引物失效,甚至电泳操作失误,甚至EB过期,甚至电极放反,种种种种的可能了。同学,我建议你平行试验三次,如果还没有,再来问。电泳操作失误,甚至EB过期,甚至电极放反,这些都可以排除,我克隆的基因是大约400bp,电泳时只能看到,在六七十bp处有隐约条带,估计是引物二...

1年前

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daweidawei 幼苗

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模板浓度过高也不容易出结果 ,建议试试稀释模板

1年前

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谭阙 幼苗

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你看你的基因的GC含量了吗?太高了也不好扩.
还有,你的模板是什么?是已经构建好了的质粒,还是cDNA你要调取基因?
你可以把你的问题提得细一些.

1年前

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伶丁 幼苗

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你说具体点,用什么软件设的引物,扩啥基因。。结果如何。好分析,这样问太泛了。
可能是退火温度不合适,试一下做梯度PCR

1年前

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