基因的克隆,转导,表达,在对目的基因PCR时,为什么一些人设计的上游引物不是从ATG开始的,而是从中上段开始
基因的克隆,转导,表达,在对目的基因PCR时,为什么一些人设计的上游引物不是从ATG开始的,而是从中上段开始
什么时候引物设计必须从目的基因的ATG开始,什么时候是可以从中间设计引物的
什么时候引物设计必须从目的基因的ATG开始,什么时候是可以从中间设计引物的
赞 zhaoxiantao 幼苗
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克隆基因的编码框时,必须从ATG开始或UTR处开始.当你想表达这个基因时,PCR产物必须包括完整的读码框；当你需要该基因融合GFP时,不仅需要从ATG开始,终止密码子必须突变掉,而且目的基因与GFP必须在一个读码框中.
而需要监测目的基因的表达水平时,如果使用RT-PCR,则最好是从基因的中上段开始设计引物,因为在RNA提取时,可能得到的部分RNA有小部分降解,或反转录时,只反转录了一部分,没有到ATG这端,因此,从中上有设计的引物更容易监测到目的基因的表达.
而需要监测目的基因的表达水平时,如果使用RT-PCR,则最好是从基因的中上段开始设计引物,因为在RNA提取时,可能得到的部分RNA有小部分降解,或反转录时,只反转录了一部分,没有到ATG这端,因此,从中上有设计的引物更容易监测到目的基因的表达.
1年前 追问
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抗肿瘤活性的研究中，这方面我不是很熟悉，我是从事植物方面的！下面是我个人的看法： 他们是不是不需要完整的蛋白表达？只是需要表达该蛋白的部分肽，而且没有ATG的话，不可能翻译呀！如果他们在文章中没有写错的话，有可能是只需要表达部分蛋白（如：活性小肽），而且在表达载体上或引物上添加有ATG。 还有一点，你看看他们PCR出来的这一段是不是和全长基因（从ATG开始的）是一个读码框的？ 我建议你最好给文章的作者发个email，问问他们是怎么回事？
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1年前1个回答
你能帮帮他们吗