给定一个cDNA序列,如何表达,纯化到蛋白质?

tdjm 1年前 已收到2个回答 举报

发条橙C 春芽

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首先根据蛋白性质及实验要求选择表达载体,比如是原核还是真核表达,是否加标签,是否控制表达位置及强度等.
然后根据载体和目的蛋白设计引物,要考虑加酶切位点,保护碱基等.
其次选择合适组织提取RNA,RT-PCR,酶切,克隆,鉴定,扩增质粒,转入宿主,诱导表达,纯化,鉴定.

1年前

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活水红颜 幼苗

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PCR,然后产物连接到pMD-T19上,注入到大肠杆菌中扩增,提取质粒,再通过酶切,连接到表达载体中,转入到表达菌种中,诱导表达,提取总蛋白,SDS检测,OK

1年前

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