实验：已知目的基因的cDNA序列,拟采用基因工程技术在哺乳动物细胞中表达该序列中的133-1941位核苷酸序列

实验：已知目的基因的cDNA序列,拟采用基因工程技术在哺乳动物细胞中表达该序列中的133-1941位核苷酸序列
我要做一个PPT,要求具体详细的实验设立步骤,越具体越好,
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大展宏图2 1年前已收到1个回答举报

养龙鱼的人花朵

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问作业的人真多
根据133-1941的序列,设计PCR引物,从cDNA中扩增该序列
把扩增后的PCR产物插入到载体中.测序确认.
再克隆到表达载体
扩增,纯化表达载体
转染细胞,得到表达

1年前追问

大展宏图2 举报

有具体一点的吗？因为要制作一个专题的PPT，要有具体的实验步骤。

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这是个非常常见的方法。你只要找到任何一篇描写把某个基因过度表达的文章，把里面的基因换成你的基因序列就可以了。
先查到该基因序列，把制定的序列copy下来后，贴到引物设计软件，比如ncbi的引物设计页面，设计出克隆引物。
得到PCR产物后，先TA克隆到TA质粒。然后酶切，提纯后，再克隆到表达质粒。然后转染细胞。
http://www.ebi.ac.uk/Tools/dbfetch/expasyfetch?AK135903
从最下面选133-1941.
设计引物的
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/tools/primer-blast/

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在哪能找到一篇你说的基因过度表达的文章吗？

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我给个试剂盒的说明书吧，免得你看不懂文章了
http://tools.lifetechnologies.com/content/sfs/manuals/pcdna3_3_topo_ta_man.pdf

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你能帮帮他们吗

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