pET-his载体为什么必须在BL21(DE3)菌,而不能在DH5α中表达?

一般人俺不告诉他 1年前 已收到2个回答 举报

snfsunwei 幼苗

共回答了18个问题采纳率:100% 举报

大肠杆菌DH5α一般做克隆或保存质粒用,BL21用来做原核表达用.BL21(DE3) 菌株用于高效表达含有噬菌体T7启动子的表达载体(如pET系列)的基因,表达效率高.T7噬菌体RNA聚合酶位于λ 噬菌体DE3区,该区整合于BL21的染色体上.DH5α可以表达抗性基因,应该也能表达外源基因,但是我们一般不用该菌作为表达菌,可能与表达量、表达产物活性有关.毕竟体外表达活的的产物是为了继续做下面的工作,没有表达量,后面什么工作都无从谈起了

1年前

8

fkuewfc111 幼苗

共回答了1个问题 举报

pET系列载体都用来自于λ 噬菌体的T7启动子,该启动子转录需要用到T7 RNA聚合酶。而野生的大肠杆菌(比方说DH5α或BL21)体内没有该酶的基因,所以无法启动该启动子后面基因的表达。BL21(DE3)菌株是在野生型BL21菌株的基础上,整合了一段来源于λ 噬菌体的DE3片段,该片段中包含了编码T7RNA聚合酶的基因,能够在IPTG或乳糖诱导下表达T7RNA聚合酶,而该聚合酶又能进一步转录T7...

1年前

0
可能相似的问题
Copyright © 2024 YULUCN.COM - 雨露学习互助 - 17 q. 0.777 s. - webmaster@yulucn.com