粮食问题一直困扰着人类．为扩大可耕地面积，增加粮食产量，沿海滩涂盐碱地的开发利用备受关注．我国科学家应用耐盐碱基因培育出

（1）切割运载体时采用的是限制酶EcoRⅠ、SmaⅠ，为了便于目的基因与运载体定向连接形成重组DNA，还应在基因两侧的A和B位置接上限制酶EcoRⅠ、SmaⅠ的识别序列．
（2）PCR技术利用的是DNA复制的原理，DNA复制具有半保留复制的特点．根据题意可知，若共用了引物Ⅱ31个，说明产生了32个子代DNA分子，由此可见目的基因扩增了5代．
（3）由于质粒是小型环状DNA，若用EcoRⅠ和PstⅠ两种限制酶同时切割载体质粒，则能形成2种不同长度的DNA片段，共有4个游离的磷酸基团．
（4）图示中将基因表达载体构建完成后没有直接导入农杆菌，而是先将其导入大肠杆菌，目的是获取大量重组质粒（让目的基因扩增）．
（5）将目的导入微生物细胞时，需要用Ca²⁺处理微生物细胞，使其成为易于吸收周围环境中DNA的感受态．因此步骤⑤⑥过程中都需用Ca²⁺处理两类细菌．从分子水平检测目的基因是否表达，采用抗原-抗体杂交法．
故答案为：
（1）EcoRⅠ、SmaⅠ
（2）5
（3）2 4
（4）获取大量重组质粒（让目的基因扩增）
（5）Ca²⁺ 抗原-抗体杂交

点评：
本题考点： 基因工程的原理及技术．

考点点评： 本题结合耐盐碱水稻新品系的培育过程图解，考查基因工程的相关知识，要求考生识记基因工程的原理及操作步骤，能准确判断图中各过程的含义，再结合图中信息准确答题．