PCR产物的长度80bp退火延伸一个循环大概要多长时间

zyl083 1年前 已收到2个回答 举报
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onlywill 幼苗

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一般实验室的流程为95℃ 5min（预热）
95℃ 50s（变性）
XX℃（退火温度,根据你的引物定）
72℃ 30s~50s（80bp 看你用什么酶延伸,一般50s足以）
以上第二步到第四步可以根据自己需要循环
72℃ 10min
25℃ 1min

1年前

2

zlyqq 幼苗

共回答了1个问题 举报

这关键是看你用什么酶还有你的序列的复杂程度即GC含量，如果就是平常的序列，平常的酶一般30s足以，，如果要是快速酶的话10s以内就可以搞定，你这么短的链跟引物差不多长了，扩不出来不是延伸时间的问题吧。可能是反应体系还有引物，你可以逐步验证下...

1年前

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