菌落PCR阳性,目的片段2300bp,假阴性可能性很小,但是我取菌涂板子后,竟然没长出来,

菌落PCR阳性,目的片段2300bp,假阴性可能性很小,但是我取菌涂板子后,竟然没长出来,
这是不是说明质粒跑到菌液去了?取菌扩大培养又可以明显看到菌扩增了?
gdttd2000 1年前 已收到1个回答 举报

蔡洁 花朵

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有抗性吗?菌扩增,应该是重组质粒有转化进去的.
菌液PCR建议:
上游引物:选择载体上的一段序列
下游引物:选择目的基因的反向引物
这种假阳性可能性很小

1年前 追问

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gdttd2000 举报

这样不就要重新设计引物了?我最大的问题是明明是从有抗性的培养基里挑出来的菌,但是重新涂板却长不出菌,难道质粒都跑到培养基里去了?

举报 蔡洁

你如果是从有抗性的培养基里挑出来的菌,做菌液PCR,出现假阳性的可能性非常之大。因为你用的引物是目的基因的特异性引物。所以建议你以后做菌液PCR,用我上述的引物去PCR,能P出来的几乎可以确定是阳性的。 然后,你说挑出来的菌,液体培养基培养之后(是这个意思?),重新涂板却长不出菌,说明就是假阳性。 还有一种可能,你构建的重组质粒没问题,但是转化时,感受态有问题,没转化成功~~ 望采纳哦~~
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