【高分求助】鸡肝组织RNA提取问题
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最近用Trizol提取鸡肝组织总rna,结果不甚理想,28,18的条带基本没有,5s的条带是很明显,我估计被降解,但是我在提取的过程中很是注意,应该是没有rna酶的污染.
但是提取过程中还是有些问题的,比如,用Trizol裂解后,离心,上清液是淡黄色的,加入氯仿后呈黄色的浑浊状,加入异丙醇后,就立刻有絮状物产生（估计是核酸）,最后RNA为淡黄色.点样跑胶,没有发现基因组DNA,A260/280 为1.82（应该是纯度可以）
有何异常
鸡肝是新鲜鸡肝液氮速冻，-80度保藏了3天
我用同样的试剂提取海拉细胞ok的
最近用Trizol提取鸡肝组织总rna,结果不甚理想,28,18的条带基本没有,5s的条带是很明显,我估计被降解,但是我在提取的过程中很是注意,应该是没有rna酶的污染.
但是提取过程中还是有些问题的,比如,用Trizol裂解后,离心,上清液是淡黄色的,加入氯仿后呈黄色的浑浊状,加入异丙醇后,就立刻有絮状物产生（估计是核酸）,最后RNA为淡黄色.点样跑胶,没有发现基因组DNA,A260/280 为1.82（应该是纯度可以）
有何异常
鸡肝是新鲜鸡肝液氮速冻，-80度保藏了3天
我用同样的试剂提取海拉细胞ok的
赞 茕茕於菟 幼苗
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鸡肝新鲜不
充分研磨了吗,组织和细胞不一样,是需要机械辅助破碎的,否则等trizol浸透,RNA都被内源RNAase降解了,另外,还有可能细胞不能充分破裂,妨碍了RNA释放；
过程中开始几步rna污染不重要,最后几步特别重要,不能污染
5s是不是很亮的一片拖尾,如果是的话,就是降解了.
如果你是做RT,不妨接着试一次,记得设好阴性和阳性对照；如果做Northern,那就重提吧.
鸡肝RNAase多,提取时小心些.
或许:考虑以下几个方面：
1、组织选取：是否是新鲜的组织；
2、试剂：各试剂是否完全排除了RNAase的污染,要一种一种试剂的排查；
3、操作方法：是否合理,有无不规范的操作及不合理的实验设计；
4、运气.
充分研磨了吗,组织和细胞不一样,是需要机械辅助破碎的,否则等trizol浸透,RNA都被内源RNAase降解了,另外,还有可能细胞不能充分破裂,妨碍了RNA释放；
过程中开始几步rna污染不重要,最后几步特别重要,不能污染
5s是不是很亮的一片拖尾,如果是的话,就是降解了.
如果你是做RT,不妨接着试一次,记得设好阴性和阳性对照；如果做Northern,那就重提吧.
鸡肝RNAase多,提取时小心些.
或许:考虑以下几个方面：
1、组织选取：是否是新鲜的组织；
2、试剂：各试剂是否完全排除了RNAase的污染,要一种一种试剂的排查；
3、操作方法：是否合理,有无不规范的操作及不合理的实验设计；
4、运气.
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