SDS-Page电泳,我配的胶总是不凝固

SDS-Page电泳,我配的胶总是不凝固
配方是这样的:
ACR-BIS 4ml
tris-hcl (ph8.9)3.8ml
10% sds 0.1ml
水 2ml
过硫酸铵是现配的 浓度10% 我一开始加的是50ul,试了一次不行,加到了200ul,TEMED 最多加到了100u,可还是不凝固,
除了过硫酸铵和TEMED,可能会是其他成分有问题吗?
我昨天用同样的配方做胶,大约1小时凝固了.今天却两三小时也不凝,放在37度培养箱也没用,过硫酸铵是今天新配的,其他都是昨天的试剂.真是奇了怪了啊
37364534 1年前 已收到1个回答 举报

丫头_乖 幼苗

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那聚丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺 浓度是多少,会不会是它的问题.

1年前 追问

10

37364534 举报

聚丙烯酰胺 浓度是 29% 甲叉双丙烯酰胺 浓度是 1% 是现配的 TRIS-HCL是1M的,PH 8.9

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那没问题啊,你配得聚丙烯酰胺 甲叉双丙烯酰胺 有过滤吗?我们的都是避光过滤避光保存的。

37364534 举报

过滤了,0.50um膜过滤的。棕色瓶子,4°冰箱保存。 acr-bis不太好溶,搅拌了十分钟,还是有一点点白色杂质溶不了。搅拌过程中感觉烧杯变得很冰凉。这正常吗?acr和bis都是进口试剂,保质期内,才开封的,固体室温保存。会不会是这个试剂我配得有问题啊? 其他试剂,缓冲液PH确认是8.8没错。过硫酸铵是现称现配的,溶解的时候有噼里啪啦的响声。TEMED才买的。我觉得也许就是acr-bis的问题了

举报 丫头_乖

下边是我们实验室的配方,分离胶大约半个小时凝固,浓缩胶更快。以供参考。 (1) 4×积层胶缓冲液: Tris-Cl 6.06 g 10%(W/V)SDS 4 ml 去离子水溶解定容至100 ml ,用盐酸调至pH 6.8。 (2) 4×分离胶缓冲液: Tris-C1 18.17 g 10%SDS 4 ml 去离子水溶解定容至100 ml,用盐酸调至pH 8.8。 (3)30%聚丙烯酰胺溶液(30%AC):丙烯酰胺 29 g 双丙烯酰胺(N,N’-甲叉双丙烯酰胺) l g 去离子水溶解并定容至100 ml,滤去不溶物,装入棕色瓶于4℃ 保存。 (4)10%过硫酸铵(AP):称取1克过硫酸铵溶于9ml双蒸水,定容至10ml,分装冻存备用。 配制: A: 12.5%分离胶 双蒸水 1.62 ml 30%AC 1.95 ml 4×分离胶缓冲液 1.24 ml 10%AP 40μl TEMED 4μl 混匀灌制。 B: 5%浓缩胶 双蒸水 1 ml 30%AC 300 μl 4×浓缩胶胶缓冲液 445 μl 10%AP 30 μl TEMED 5 μl 混匀灌制。
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