xxsg85 幼苗
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(1)根据题干信息“野生型腺病毒含有抑制P53基因活性的55Kda基因,以及病毒复制基因E1”可知,构建基因表达载体时,应选用EcoRI和BamHI切割载体和含有目的基因的DNA,这样既可以去除E1基因以防止病毒复制后损伤健康细胞,同时还能破坏55Kda基因以防止其抑制P53基因的活性.
(2)由于切下片段有可能与原基因重新结合,因此将目的基因与腺病毒重组时,重组的成功率较低,依然还有大量非重组的野生型病毒的DNA.
(3)选用含E1基因的肿瘤细胞进行重组病毒侵染,可以让病毒仅在含有E1基因的肿瘤细胞中复制,而在不含E1的人体正常细胞中不能复制,提高安全性.重组病毒与非重组病毒的DNA分子长度不同,质量(密度)也不同,因此筛选重组病毒时,可采用离心分层纯化法.
(4)只用限制酶EcoRI切割能产生700kb、200kb和100kb三种长度的DNA片段,同时用EcoRI和HalⅢ两种酶切割可产生420kb、280kb和100kb三种长度的DNA片段,可见,限制酶HalⅢ又将长度为700Kb的DNA片段切成420kb和280kb两段,将长度为200kb的DNA片段切成100kb的两段,由此可推断限制酶HalⅢ在该DNA片段上的切割位点有2个.
故答案为:
(1)EcoRI和BamHI E1 55Kda 抑制P53基因的活性
(2)切下片段有可能与原基因重新结合
(3)可以让病毒仅在含有E1基因的肿瘤细胞中复制,而在不含E1的人体正常细胞中不能复制,提高安全性 重组病毒与非重组病毒的DNA分子长度不同,质量(密度)也不同
(4)2
点评:
本题考点: 基因工程的原理及技术.
考点点评: 本题结合图解,考查基因工程的技术和原理,要求考生识记基因工程的工具及操作步骤,能根据图甲和图乙中的限制酶分布位点及题干信息“野生型腺病毒含有抑制P53基因活性的55Kda基因,以及病毒复制基因E1”选择合适的限制酶;能根据电泳结果图推断限制酶HalⅢ切割位点数目.
1年前
1年前2个回答
1年前1个回答
1年前1个回答
你能帮帮他们吗