质粒多位点酶切片段回收?我做质粒酶切,除了引物带的酶切位点外,但是相隔40-50bp还有另外一个酶切位点,是不是可以做一

质粒多位点酶切片段回收?
我做质粒酶切,除了引物带的酶切位点外,但是相隔40-50bp还有另外一个酶切位点,是不是可以做一个不完全酶切,得到我的目的片段,采用琼脂糖凝胶电泳是否可以分开,具体电泳的参数又是怎么设计的呢?

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引物两端的酶切位点是否一样,还有,距离40-50bp的酶切位点是否也是同一个酶.如果是的话,环形质粒就会切成三段,有一个40-50bp,有一个目的条带,还有载体条带,是可以分开的.如果是不同的酶,你就可以选择使用不同的酶,根据你的要求进行切开.
建议在设计引物时,选择目的基因中没有的酶切位点,选择载体上有的,并且根据在载体上的位置,确定是上游引物还是下游引物,在连接表达载体时就不会出现反连,操作就容易多了.

1年前

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