质粒酶切我最近在做连接,总是连不上,所以我想分析是哪步出问题.我想将酶切完的质粒载体与未酶切的质粒跑电泳看是否酶切成功,

质粒酶切
我最近在做连接,总是连不上,所以我想分析是哪步出问题.我想将酶切完的质粒载体与未酶切的质粒跑电泳看是否酶切成功,但不知道跑电泳能不能分辨出来(质粒大小10kb-12kb),如果可以,琼脂糖浓度是多少.
冰山雪人sx 1年前 已收到2个回答 举报

wdl_05 幼苗

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应该能的,没有酶切的载体有很大一部分是超螺旋的,会跑得比本来的大小快,酶切结束后就线性化了.
你在做连接时加一个只加载体不加insert的对照,如果对照不长的话证明载体切得没问题.你就多做几个载体和Insert的比例,4度连接过夜,一定能长.
另外,insert可以多加一点

1年前

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957155 幼苗

共回答了14个问题采纳率:85.7% 举报

你怀疑你的质粒没切开?
要是没切开的话,做转化的时候会长出很多的菌落,如果没有,那说明你的质粒切开,但是没连接上。
开始的酶切应该选择比较好的公司的酶。你在检查下你的酶切位点设计的有没问题
你还可以找别人要别人连接的其他片段的质粒,(你的酶切位点没有被破坏就好),你再酶切的时候就能看出有没切开
如果你要看有没有切开,1%的跑的时间长点应该也能看到区别吧...

1年前

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