如何检测蛋白在大肠杆菌中的不表达是因为mRNA的不稳定?

不表达的因素多了：
细胞毒性,N端信号肽,稀有密码子,等等.
你换GST或者Trx融合试过了么?hongkaichen(站内联系TA)这是老师的一个作业,思考题,跟实验无关,因为mRNA不稳定也可能造成蛋白不表达,所以如果是这种原因,就是让我们用什么方法验证是不是这种原因.开始我觉得可以用观察多聚核糖体现象来验证,但这种方法不能排除菌自身的蛋白表达也能产生这种现象.如果用RT-PCR P出来了不知道能不能说有mRNA存在,然后排除掉这种原因?lifefamily(站内联系TA)真的,我还第一次听说跟mRNA不稳定有关,孤陋寡闻了……
三、mRNA稳定性与翻译控制
mRNA稳定性主要取决于3’—UTR结构
1．poly(A)尾增加mRNA稳定性,
2．3’-UTR中UA序列导致mRNA不稳定．
高手帮我扫盲一下!hongkaichen(站内联系TA)在大肠杆菌中表达可能就没有polyA修饰,mRNA不稳定我觉得可能就是半衰期短,不能及时翻译.lifefamily(站内联系TA)关键是,大肠杆菌是如此成熟的一个表达系统,为何就你这个蛋白的mRNA没有polyA修饰呢?hongkaichen(站内联系TA)Originally posted by lifefamily at 2009-5-13 15:38:
关键是,大肠杆菌是如此成熟的一个表达系统,为何就你这个蛋白的mRNA没有polyA修饰呢?这个我不知道怎么回答你,在大肠杆菌里确实有一小段polyA,如果PolyA酶突变了,或其他与ployA形成有关的蛋白突变了导致PolyA不能形成,这样导致mRNA不稳定也可能.其实我想问的重点是假如是mRNA不稳定的话,有什么方法可以检测?如果你要说不可能是mRNA不稳定照成的,那么你就设计一个实验来排除这种可能,理论还是需要实验来验证的.:)lifefamily(站内联系TA)RT-PCR加Northern blot
其他想不到了.