LA Taq pcr的问题我用LA Taq 扩增一个长度大概1300bp的序列 然后去测序 出了很多错配不说 还居然多了

LA Taq pcr的问题
我用LA Taq 扩增一个长度大概1300bp的序列 然后去测序 出了很多错配不说 还居然多了一个碱基~这是怎么回事?反应条件不合适吗?
diskey 1年前 已收到4个回答 举报
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333susan 幼苗

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LA Taq是一种保真度非常高的DNA聚合酶,出现这样的问题你应该在自己的PCR反应体系组分以及循环条件上找原因,当然还是老方法——排除法.

1年前

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dfhjsdf 幼苗

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一般来说，测序结果很少出错的。建议你从一下几个方面着手：
1 给出的测序结果可能是你基因的互补链，所以当你比对的时候就会显示很多错配的，你用反向互补序列再比对下。
2 你的序列需要两个反应，多出的可能是序列拼接的时候出的问题，你对照测序图谱看下，在两个反应的交叉位置。
3 若上面的原因都不是，若你PCR的效果（条带的亮度，大小，特异性）都很好，那就是你引物特异性的问题了，这...

1年前

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青色青色 幼苗

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pcr和测序都可能出错：
PCR特异性如何，有没有杂带？用什么测序，PCR产物还是质粒？纯化没有？浓度够不够？
测序图谱好不好？错配集中在一处还是分散？附近有没有特殊结构，如简单重复、回文？是在测序反应末端吗？

1年前

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aking34z 幼苗

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如果1300bp的片段都能出现很多错配的话，建议你检查你的LA Taq的质量。一般普通的Taq在正常条件下1KB片段也才出现2~5个错配。

1年前

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