做克隆时,请问在引物前加的一段保护碱基和内切酶序列需要和cDNA互补吗?

bzhang69 1年前 已收到2个回答 举报

-黄泉 幼苗

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不需要,引物的5‘端可以进行修饰,3’端需要严格保证与cDNA互补.举个例子
cDNA:ATGatcgatcgatcgTAA
引物:gg catatg TACtagcta
其中gg为保护碱基,catatg为NdeI酶切位点,都无须与模板配对,引物后面序列需要保证配对.

1年前

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mqylchu 幼苗

共回答了26个问题采纳率:96.2% 举报

不需要互补,在扩增的时候主要靠内切酶后面的碱基和模板互补配对。同时,你在使用引物Tm时,要除去保护碱基以及酶切酶序列的碱基,也就是说你实际的Tm值与引物合成单上面的Tm值是不同的,要使用实际的Tm值。

1年前

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