原代肝细胞培养问题最近在分离原代肝细胞,用的是两步灌流法,就是先用灌流液,后用胶原酶灌流消化,然后用200目筛网过滤,5

原代肝细胞培养问题
最近在分离原代肝细胞,用的是两步灌流法,就是先用灌流液,后用胶原酶灌流消化,然后用200目筛网过滤,50g离心3min,之后用PBS洗3次,也是上面的转速和时间,得到下层的肝细胞,用培养液悬浮,接到6孔板里,然后就有浑浊的沉淀,那个沉淀是肝细胞吧?4个小时之后换液,请问这个时候肝细胞是不是已经贴壁了,我看到还是要多沉淀,也不知道是死细胞还是没贴壁的细胞,要多长时间才换液呢?

绿绿的绿衬衣 1年前已收到1个回答举报

xie6600 幼苗

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原代肝细胞很容易贴壁生长,4小时肯定能贴壁.
“然后就有浑浊的沉淀,那个沉淀是肝细胞吧?”将此沉淀用培养液或pbs稀释,加台盘蓝染色,显微镜下观察,若为活细胞,通常就是肝细胞了,要培养好,最好有大于85%以上的活性.
原代肝细胞最好生长在鼠尾胶原上,也就是用鼠尾胶原铺板,然后再普细胞.
4小时后换液,然后每20小时左右换液,通常原代肝细胞难以增值,但是维持20天左右没问题.

1年前

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