PCR 产生比目的片段小的片段,这是怎么回事,怎么样处理?

PCR 产生比目的片段小的片段,这是怎么回事,怎么样处理?
PCR扩增时,电泳后发现的得到的片段远远小于目的片段.目的片段曾今扩增出来过?这是什么原因,怎么样处理 .
88008800 1年前 已收到4个回答 举报
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唧唧喳喳4 幼苗

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你两次实验的PCR模板是否同一个样本?如果是同一个样本,那就说明你的PCR试剂或者引物有问题,更换
如果不是同一个样本,就再做一次实验
把曾经扩增出目的片段的那个DNA或cDNA样本,现在扩增片段小于目的片段的样本,两个样本一起再做一次PCR,比较一下结果就知道了.
如果两个都做不出来说明你的引物或者PCR试剂有问题
如果第一个做出来,第二个做不出来,那就是第二个不表达这个基因或者表达量很低.

1年前

4

show花火 幼苗

共回答了32个问题 举报

1. primer problem. Unspecific amplification. Redesign.
2. Optimize PCR condition
3. Sequenced that little band see whether it's your problem or the database problem.

1年前

2

q16736 幼苗

共回答了23个问题 举报

引物选错了？

1年前

1

sihaozi1985 幼苗

共回答了1个问题 举报

前后所用的PCR试剂是不是都一样？如果一样那可能是引物的问题。
扩增得到的片段很小，那可能是引物二聚体，重新设计引物或者改善一下PCR反应体系中的一些离子浓度等，或改变一下退火温度。
试试热启动PCR或降落PCR来扩增目的片段

1年前

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