实时荧光定量pcr两步法与三步法的异同是什么?如何选择使用?比如引物退火是54度,选择三步法还是2步法?

独孤一生---求一 1年前 已收到2个回答 举报
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浪漫小羽 春芽

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异同?我觉得还是看你用的机器和试剂盒吧,主要是那个聚合酶的要求.有的推荐两步法,有的推荐三步法.比如,ABI,roche都推荐两步法,tiangen的推荐三步法.我觉得,如果引物设计时的Tm值如果接近60度（比如用ABI的primer exp...

1年前 追问

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独孤一生---求一 举报

谢谢师兄！我今天做预实验，退火温度54度，用2步法扩增效率确实太差，下午用三步法做了下，明显效果提高。但是因为封口胶没贴紧，液体跑了，所以结果也不是太好！早点提问就好了，浪费了不少试剂，呵呵，非常感谢！

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你是用的96孔板吧，这个在贴封口膜时，一定要用刮板来回刮紧，再对着光线看孔口是否封好。如果怕封口膜被污染，可以在封口膜上放一个干净的一次性手套，再用刮板刮。 祝你试验成功！多学多问加实践，肯定能出好结果！

爱晴的木头 幼苗

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嗯，看机器和试剂和的要求，不同的试剂不一样。详细看说明书。机器对试剂的种类也有要求。要看看试剂盒适用于哪些品牌型号的仪器，不合适的话一样也做不好。

1年前

2
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