为什么我的目的基因连接克隆载体转化、提质粒后,酶切鉴定正确,而质粒PCR和菌液PCR鉴定都不正确呢?着急

为什么我的目的基因连接克隆载体转化、提质粒后,酶切鉴定正确,而质粒PCR和菌液PCR鉴定都不正确呢?着急
加点 kml?但是我转化后菌落长的还可以啊.酶切目的带在1000左右,质粒PCR在750左右了
ruorantian 1年前 已收到1个回答 举报

lyjuan暖暖 幼苗

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不管酶切还是PCR,都是间接的结果.要确定克隆的正确,一定要测序的啊.
你测个序,问题就迎刃而解了.到底是什么问题也就清楚了.

1年前 追问

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ruorantian 举报

我前些天去遇到一样的问题,酶切鉴定正确,但测序后什么也不是呢

举报 lyjuan暖暖

所以根本就没有酶切的必要。这说明你在克隆的时候PCR产物就出错了。克隆了无关序列。大小正好和你的目标序列差不多。再次PCR的时候又发生了非特异性扩增,所以产物的大小又发生了变化。 你的PCR引物肯定有大问题。
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