（2009•普陀区一模）如图（一）为某基因工程中利用的质粒筒图，小箭头所指分别为限制性内切酶EcoRI、BamHI的酶切

（2009•普陀区一模）如图（一）为某基因工程中利用的质粒筒图，小箭头所指分别为限制性内切酶EcoRI、BamHI的酶切位点，amp^R为青霉素（抗生素）抗性基因，tct^R为四环素（抗生素）抗性基因，P为启动因子，T为终止子，ori为复制原点．已知目的基因的两端分别有包括EcoRI、BamHI在内的多种酶的酶切位点．如图（二）为几种酶作用于基因的位置．请回答下列问题：
（1）在基因工程中常用的工具有三种：一是用作切取目的基因的______酶；二是将目的基因与运载体拼接的______酶；三是作为运载体的质粒．
（2）将含有目的基因的DNA与经特定的酶切后的动载体（质粒）进行拼接形成重组DNA，理论上讲，重组DNA可能有“______”、“______”、“______”三种，其中有效的（所需要的）重组DNA是______，因此需要对这些拼接产物进行分离提纯．
（3）利用图（一）所示的质粒拼接形成的3种拼接产物（重组DNA）与无任何抗药性的原核宿主细胞接种到含四环素的培养基中，能生长的原核宿主细胞所含有的拼接产物（重组DNA）是______．
（4）有效的重组DNA成功导入受体细胞进行表达时，首先需要进行转录，RNA聚合酶识别和结合的位点是图（一）中的______．在动物基因工程中，将重组DNA导入受体细胞的常用方法是______．
（5）在基因工程中，作用于图（二）所示a位置的酶是______；作用于b位置的酶是______．

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路呢幼苗

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解题思路：据图（一）分析，质粒中含有限制性内切酶EcoRI、BamHI的酶切位点，便于插入目的基因；amp^R为青霉素（抗生素）抗性基因和tct^R为四环素（抗生素）抗性基因属于标记基因，便于重组质粒的鉴定和筛选；P为启动子是RNA聚合酶的识别和结合位点，启动转录过程；T为终止子，是终止转录的特点核苷酸序列．
根据图（二）分析，a为磷酸二酯键，b表示氢键．

（1）在基因工程中常用的工具有三种：一是用作切取目的基因限制酶；二是将目的基因与运载体拼接的DNA连接酶；三是作为运载体的质粒．
（2）用同一种限制酶将有目的基因的DNA与运载体（质粒）切割，形成相同的黏性末端，经DNA连接酶进行拼接形成重组DNA，可能有“目的-目的基因”、“目的基因-运载体”、“运载体-运载体”三种，其中有效的（所需要的）重组DNA是目的基因-运载体．
（3）图（一）所示的质粒中含有tct^R为四环素（抗生素）抗性基因，拼接形成的3种拼接产物（重组DNA）与无任何抗药性的原核宿主细胞接种到含四环素的培养基中，能生长的原核宿主细胞所含有的拼接产物必需含有四环素抗性基因，即运载体-运载体、目的基因-运载体．
（4）据图分析，P为启动子，是RNA聚合酶识别和结合的位点；将重组DNA导入动物受体细胞的常用方法是显微注射法．
（5）在基因工程中，限制酶（限制性内切酶）能识别特定的核苷酸序列，并在特定的位点切割磷酸二酯键，即作用于图（二）的a位置；DNA解旋酶作用于氢键，即b位置．
故答案为：
（1）限制酶（限制性内切酶） DNA连接酶
（2）目的基因-目的基因目的基因-运载体运载体-运载体目的基因-动载体
（3）运载体-运载体目的基因-运载体
（4）P（启动子）显微注射法
（5）限制酶（限制性内切酶） DNA解旋酶

点评：
本题考点：基因工程的原理及技术．

考点点评：本题考查基因工程的相关知识，意在考查学生的识图和解决问题的能力，属于中档题．

1年前

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