双酶切质粒后电泳 双酶切质粒pgl 6.24（5882bp）无共同buffer kPN I 2.5小时 bgl II 3

双酶切质粒后电泳
双酶切质粒pgl 6.24（5882bp）无共同buffer kPN I 2.5小时 bgl II 3.5小时 之后电泳 为什么出来1万多的带?跑的比原来质粒还有10000bp的marker还慢……怎么回事啊……求高人指点
hzxzy 1年前 已收到3个回答 举报
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蛮苕的人 幼苗

共回答了24个问题采纳率：83.3% 举报

很显然是质粒发生了自连啦.切开的2个质粒连起来了,因此相当于2个质粒的大小.你需采用磷酸化避免自连发生.

1年前

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luminhust 幼苗

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请首先检查酶切前空载体的大小。最好先在KpnI单切以后，BglII二次酶切前，先检测一下，确认质粒的实际大小；确认无误了再进行BglII二次酶切。分段进行验证排查。
单纯的酶切后没有连接酶时，能引发自连的说法，理论上也许有；不过从我的7,8年的实验经历中，从来没有听说过谁真的出现过，更是从来没有见过。
从我以往的经历出发，最可能出现的问题就是使用了错误的质粒，或者质粒中有所不知道的...

1年前

2

青草味道 幼苗

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双拷贝质粒，

1年前

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你能帮帮他们吗

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