在基因工程中不会出现（　　）A．限制性内切酶用于目的基因的获得B．DNA连接酶将黏性末端的碱基连接起来C．目的基因须有运

解题思路：基因工程技术的基本步骤：
（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成．
（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等．
（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法．
（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术．个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等．

A、获取目的基因时可能用到限制性内切酶，A正确；
B、DNA连接酶将黏性末端的磷酸二酯键连接起来，B错误；
C、目的基因须有运载体导入受体细胞，C正确；
D、最后需要检测目的基因是否已成功表达，D正确．
故选：B．

点评：
本题考点： 基因工程的原理及技术．

考点点评： 本题考查基因工程的原理及技术，要求考生识记基因工程的原理、工具及操作步骤，掌握各步骤中的相关细节，能结合所学的知识准确判断各选项，属于考纲识记和理解层次的考查．