您好.我最近的PCR扩的产物成弥散状,但是能看见目的条带,这是怎么回事啊,我之前试条件时都没有弥散

您好.我最近的PCR扩的产物成弥散状,但是能看见目的条带,这是怎么回事啊,我之前试条件时都没有弥散
这样的产物酶切能切吗?
weiyzlyg 1年前 已收到2个回答 举报

永远微笑的罗密欧 春芽

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可能性超多的
如果是同一个模版,同一个引物,同一条件的PCR,考虑模版/引物/buffer是否污染,引物是否时间比较久有降解.
Mg浓度/退火温度是否有改变?考虑降低Mg或者提高退火温度减少非特异扩增.
电泳缓冲液不干净也可能会使条带变难看.

1年前 追问

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weiyzlyg 举报

是这样的,DNA不同(但别人扩的就没有拖带),酶,缓冲液都是新的。引物前天我扩的都很好(当时扩的很少,就几个样)。条件没变。

举报 永远微笑的罗密欧

如果你再随机挑少量几个样品扩增:还有问题的话,建议你微调PCR的Mg或退火温度条件;如果少量样品没有问题,可能是你在做大量样品的时候时间比较长,引起降解或酶活性降低,注意一直在冰上操作哦。 可以直接割胶回收纯化之后酶切,如果你之后要连接载体作克隆的话,还是建议你再优化条件,单一条带最好。

LN983 幼苗

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电泳糟的一个电极极是不是有损坏

1年前

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