英语翻译1) 预杂交的目的及原理：是用非特异性DNA分子(鲑精DNA或小牛胸腺DNA)及其它高分子化合物(巨蔗糖400和

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1) 预杂交的目的及原理：是用非特异性DNA分子(鲑精DNA或小牛胸腺DNA)及其它高分子化合物(巨蔗糖400和牛清蛋白等)将膜上的非特异性位点封闭,从而避免了探针与膜及与非特异性核酸的结合.
2) 杂交温度的选择：杂交反应温度的选择是核酸杂交实验中非常关键的因素.若反应温度低于Tm 10～15℃,碱基顺序高度同源的互补链可形成稳定的双链,错配对减少.但是,如果反应温度太低（小于Tm-30℃）,则互补碱基配对减少,错配对增多、氢键结合的更弱,反而不利于两条链的结合.经验表明,杂交通常要在高温反应条件下进行,其反应的最大速度是在低于Tm值约25℃.然而对于生物活性必须保护的复杂生物的核酸研究(如哺乳动物),核酸长时间处于高温下很显然是不利的,因为长时间的高温会引起核酸链的断裂、胶嘌呤的作用,结合到膜上的DNA脱落也会增多.这个问题可以通过使用高浓度盐溶液（如6.2mol/l NaCl）,或使用某些有机溶剂的水溶液降低反应温度来解决.现在认为,适当选择甲酰胺和盐水浓度及合适的反应温度,可使DNA复性和DNA-RNA杂交获得高特异性和更快的反应速度.
3) 洗膜的目的及原理：杂交后洗膜是使用不同离子强度的溶液依次漂洗杂交膜,以除去游离的及非特异性结合的探针.洗膜液的温度、离子强度和时间影响洗膜效果.洗膜温度应该是能解离非特异性杂交体而保留特异性杂交体.非特异性杂交体的Tm值比特异性杂交体的Tm值低,因此洗膜一般在低于Tm温度5℃～12℃下进行.洗膜液的离子强度越低,洗膜越严紧.其中SDS可以促进非特异性杂交体解离.