课本上说,当不知道目的基因序列的时候,则需要建立基因文库获取目的基因.我就没弄清楚这两者有什么必然

课本上说,当不知道目的基因序列的时候,则需要建立基因文库获取目的基因.我就没弄清楚这两者有什么必然
首先理清基因文库的概念 他可不是基因库.“基因文库一个生物体的基因组DNA用限制性内切酶部分酶切后,将酶切片段插入到载体DNA分子中,所有这些插入了基因组DNA片段的载体分子的集合体,将包含这个生物体的整个基因组,也就是构成了这个生物体的基因文库.”基因文库方法不是建立基因文库就获取了目的基因,而是通过建立了基因文库再利用探针在基因文库的大海中搜寻一定包含的目的基因.在基因文库中,不同的 DNA片段都分别在不同的克隆中扩增了,只要有该基因的探针存在,则从许多克隆中筛选一个所需的克隆是一项比较简单的工作.此外基因文库中被克隆的 DNA都是基因组中各种随机的顺序片段,某些 DNA片段还包括基因外部的邻近的甚至互相跨叠的序列,所以基因文库特别有利于研究天然状态下基因的顺序组织.所以它是获取真核目的基因的一种有效手段,常用于生产实践.不知道这样解释楼主能明白么.我以后打算当生物老师呢,呵呵.
补充：基因文库主要目的是分离目的基因,只不过直接从真核细胞中分离很麻烦,但是基因文库方便分离（见上）,所以他是需要已知序列的探针,哪怕只是目的基因序列的一部分的探针也可以,只要能识别目的基因就行.
书上的意思应该是目的基因的核苷酸序列未知（包括内含子、TATA框相应基因序列等等完整序列未知）,但是探针、mrna是已知的（它们不完整,只能用来识别目的基因,不能替代目的基因,也不能直接用来合成,否则外显子、调控序列与目的基因会有不小的差异）
因为真正的未知序列想要制备分离就很麻烦了：一般情况是将你要做的东西,丢到ncbi里面进行搜索,然后收集序列,最好选择与你做的基因的来源亲缘关系近的物种,选择出来后在ncbi中进行blast进行比对,然后找到保守序列,设计简并引物,可以从基因组中扩增也可以从rna进行扩增,如果扩增的得到的不是全基因序列,可以用walking等方法扩增得到全基因序列.得到序列后你就可以进行转化表达,分析功能了
如果你的东西DNA水平的同源性比较低的话,就要多找很多序列进行分析,然后找到比较保守的block区域.可以用codehop在线网站进行block的寻找和简并引物的设计