现有基因5‘ hind3 Sa1I EcoR1 3’

其实两个方法一般情况下区别不大.
1、先连接hind3 Sa1I EcoR1和puc18.两个基因分别PCR以后,用连接酶试接,形成复合的双基因片段,在电泳后挑出符合大小的片段（复合片段的大小基本上是两个基因大小之和,更大的是重复连接了很多次的）.再将这个片段转进质粒.然后转进模式细菌筛选.麻烦的是两个基因的连接,很容易出现乱接和环形片段.
2、直接双基因重组进质粒.两种基因直接与质粒进行连接,之后转进感受态筛选.麻烦的是质粒筛选.
第二种方式总的来说更麻烦,因为细菌培养更费时间.当然如果你们直接送去测序就当我没说.