两基因融合表达可以在设计引物时同时加HIS tag 和蛋白Linker

两基因融合表达可以在设计引物时同时加HIS tag 和蛋白Linker
做两个基因在一个表达载体中连接,表达融合蛋白,结果要纯化蛋白及抗原性分析.表达载体上没有His tag标签.
jizhang199 1年前 已收到1个回答 举报

亮哥依然拽 幼苗

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不知道你要问什么.这个挺容易做到的.就是把his taq加到设计的引物上,做2轮PCR就能把两段基因连在一起了.

1年前 追问

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jizhang199 举报

两个致病基因片段相连,表达后有两种抗原性,做免疫方面的。表达载体没HIS标签,两种蛋白都要有活性,纯化,抗体检测,用到HIS。和linker 。把HIS tag和linker都要加到引物中,要设计两段引物。怎么设计合理。

举报 亮哥依然拽

提供一个思路给你吧,毕竟我对你的实验不熟悉。
引物1F:酶切位点+GCCACC+ATG+Histaq+基因1的头部序列。
引物1R:基因2的头部序列+linker+基因1的尾部序列。
引物2F:基因1的尾部序列+linker+基因2的头部序列。
引物2R:酶切位点+基因2的尾部序列。
引物1F和1R扩增基因1,引物2F+2R扩增基因2;然后前面2个扩增的结果为模板,用引物1F和引物2R做PCR,扩增出完整序列后做双酶切连接,做出来就结束了。
你如果做过双酶切应该就知道我上面的方法,如果没做过,还是找一个边上的人教你做吧,上面说的很简单,但是做起来各种问题,不是打字能说的清的。
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