双标FITC和PE激发波长都是488,荧光照射的时候会不会“串色”

双标FITC和PE激发波长都是488,荧光照射的时候会不会“串色”
标记1:1抗用山羊抗大鼠---2抗用驴抗山羊FITC
标记2:1抗用小鼠抗大鼠---2抗用驴抗小鼠PE
用徕卡共聚焦显微镜TCS SPE扫描
纠结一:为什么无论绿色荧光或红色荧光激发,两种标记都能显示,而且一模一样
纠结二:两种标记为什么完全重叠?理论上是不会发生这样的情况
myyuyu 1年前 已收到1个回答 举报

gohome 春芽

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有几种可能:
1. 非特异性染色,你在做抗体染色前,是否用非特异性的山羊,小鼠还有驴的抗血清封闭了呢?如果没,非特异性的可能性很大.
2.2种染料的激发光相同,但是emission 不同.你选对了滤片没有?而且两个光的emission确实是有重叠的,要做消减

1年前

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