绿色荧光蛋白基因（GFP）被发现以来，一直作为一个监测完整细胞和组织内基因表达及蛋白质位置的理想标记．请根据图表回答下列
绿色荧光蛋白基因（GFP）被发现以来，一直作为一个监测完整细胞和组织内基因表达及蛋白质位置的理想标记．请根据图表回答下列问题．
（1）若图中GFP的M端伸出的核苷酸的碱基序列是-TCGA-，N端伸出的核苷酸的碱基序列是-TGCA-，则在构建含该GFP的重组质粒A时，应选用限制酶______，再对Ti质粒进行切割．
（2）若对符合设计要求的重组质粒A进行酶切，假设所用的酶均可将识别位点完全切开，请根据图表中的信息分析，若采用BamHⅠ和PstⅠ酶切，可得到______种DNA片段．
（3）检测GFP是否已重组到猪胎儿成纤维细胞的染色体DNA上，可在荧光显微镜下观察GFP的表达，图中绿色荧光蛋白转基因克隆猪的转基因操作中的GFP既是______，也是______．
（4）如果将外源基因导入猪受精卵，则外源基因可能随机插入到猪受精卵DNA中．这种受精卵有的可发育成转基因猪，有的却死亡．请分析因外源基因插入导致受精卵死亡的最可能原因______．
（1）若图中GFP的M端伸出的核苷酸的碱基序列是-TCGA-，N端伸出的核苷酸的碱基序列是-TGCA-，则在构建含该GFP的重组质粒A时，应选用限制酶______，再对Ti质粒进行切割．
（2）若对符合设计要求的重组质粒A进行酶切，假设所用的酶均可将识别位点完全切开，请根据图表中的信息分析，若采用BamHⅠ和PstⅠ酶切，可得到______种DNA片段．
（3）检测GFP是否已重组到猪胎儿成纤维细胞的染色体DNA上，可在荧光显微镜下观察GFP的表达，图中绿色荧光蛋白转基因克隆猪的转基因操作中的GFP既是______，也是______．
（4）如果将外源基因导入猪受精卵，则外源基因可能随机插入到猪受精卵DNA中．这种受精卵有的可发育成转基因猪，有的却死亡．请分析因外源基因插入导致受精卵死亡的最可能原因______．
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解题思路：本题中重点考查了对限制性内切酶的理解，当一种限制性内切酶在一个特异性的碱基序列处切断DNA时，就可在切口处留下几个未配对的核苷酸片段，即5’突出．这些片断可以通过重叠的5′末端形成的氢键相连，或者通过分子内反应环化．因此称这些片段具有粘性，叫做粘性末端．
当限制性内切酶作用于特定的DNA时，把这段序列沿着特定的切点切开的这个过程分两种情况：
①沿着中轴线切口（即沿着DNA双链中对应的磷酸二酯键）切开，得到的就是两个平末端；
②在中轴线的两端切口切开，得到的就是两个黏性末端．例如：EcoRⅠ限制性内切酶就可以识别G/AATTC的DNA序列，然后在G和A间切开，得到的就是两个黏性末端（之间可以根据碱基互补配对原则重组）限制酶的切口不都是一长一短的，一长一短的叫黏性末端，一样长的叫平末端．“粘性末端”在高中教材中也作“黏性末端”．
当限制性内切酶作用于特定的DNA时，把这段序列沿着特定的切点切开的这个过程分两种情况：
①沿着中轴线切口（即沿着DNA双链中对应的磷酸二酯键）切开，得到的就是两个平末端；
②在中轴线的两端切口切开，得到的就是两个黏性末端．例如：EcoRⅠ限制性内切酶就可以识别G/AATTC的DNA序列，然后在G和A间切开，得到的就是两个黏性末端（之间可以根据碱基互补配对原则重组）限制酶的切口不都是一长一短的，一长一短的叫黏性末端，一样长的叫平末端．“粘性末端”在高中教材中也作“黏性末端”．
（1）由于图中GFP的M端伸出的核苷酸的碱基序列是-TCGA-，因而M端是限制酶HindⅢ剪切形成的黏性末端，N端伸出的核苷酸的碱基序列是-TGCA-，因而N端是限制酶PstⅠ剪切形成的黏性末端．
（2）PstI 可将重组质粒的N端切开，而BamHⅠ能在重组质粒的黑色部分切开，这样就得到2种DNA．
（3）据图解，可知最终要得到绿色荧光猪，因此GFP是目的基因，由于GFP能合成绿色荧光蛋白，可据此检测GFP是否成功导入细胞，作为标记基因．
（4）外源基因的随机插入可能破坏了生命活动必需的某些基因，使受精卵生命活动必需的某些基因不能正常表达．从而导致受精卵死亡．
故答案为：
（7分）
（1）HindⅢ和PstⅠ
（2）2
（3）目的基因 标记基因
（4）外源基因的插入使受精卵内生命活动必需的某些基因不能正常表达
点评：
本题考点： 基因工程的应用．
考点点评： 本题考查基因工和胚胎工程相关知识，能运用所学知识与观点，通过比较、分析与综合等方法对某些生物学问题进行解释、推理，做出合理的判断或得出正确的结论的能力，从题图获取信息的能力．
1年前
9
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