用氯化钙法将质粒DNA转入大肠杆菌实验中,转化成功的关键有哪些?

哪夜我都是dd人 1年前 已收到1个回答 举报

aimf 幼苗

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影响转化效率的因素很多,主要有:感受态细胞制备的质量、受体菌生长期(大肠杆菌在对数生长期易产生感受态)、质粒的大小和构型、所用试剂的纯度、接种前菌种的保藏方式、冰浴时间(延长冰浴时间可略微提高转化率)、器皿的清洁度、化合物及无机离子(Rb+、Mn+、二甲基亚砜能适当提高转化率)、质粒与细胞个数的比例(质粒与细胞个数比例在1:1以下时,转化率随着加入DNA的量增加而呈线性增加).
注意事项:
(1)细胞生长状态和密度.密度不足或过高会使转化率下降.
(2)质粒DNA的质量和浓度.用于转化的质粒DNA应主要是共价闭环DNA.转化率与外源DNA的浓度在一定范围内成正比,量过多货体积过大时,转化率下降.
(3)试剂的质量.
(4)防止杂菌和其他外源DNA的污染.
(5)根据所需质粒DNA的特性,设置相应的选择性培养基进行筛选,有的可能还需进行多补筛选.

1年前

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